Вестерн-блоттинг
-
Основы вестерн-блоттинга
- Вестерн-блоттинг — это метод анализа белков, который включает в себя перенос белков на мембрану и последующее связывание с антителами.
- Антитела используются для обнаружения и количественного определения белков, а также для их разделения.
-
Подготовка и перенос белков
- Белки подвергаются электрофорезу для разделения и переноса на мембрану.
- Мембрана должна быть тщательно подготовлена и обработана для обеспечения надежного связывания белков с антителами.
-
Инкубация с антителами
- Первичные антитела связываются с белками, образуя специфические комплексы.
- Вторичные антитела связываются с первичными антителами, усиливая сигнал и позволяя обнаруживать белки в низких концентрациях.
-
Обнаружение и визуализация
- После удаления несвязанных антител вестерн-блоттинг готов к обнаружению белков, связанных с антителами.
- Для количественного определения используются различные методы, включая колориметрию, хемилюминесценцию и радиоактивную метку.
-
Вторичное зондирование и очистка мембран
- Мембраны из PVDF обеспечивают более легкое повторное использование и очистку по сравнению с нитроцеллюлозными мембранами.
- PVDF мембраны толще и более устойчивы к повреждениям.
-
Спецификация минимальных требований
- Для воспроизводимости результатов вестерн-блоттинга важно указывать различные параметры эксперимента.
- Многие опубликованные статьи не охватывают все переменные, поэтому важно описать все условия эксперимента для точности результатов.
- Пересказана только часть статьи. Для продолжения перейдите к чтению оригинала.
Полный текст статьи: