Вектор (молекулярная биология)
-
Векторы в молекулярном клонировании
- Векторы используются для переноса чужеродной ДНК в другие клетки.
- Основные типы векторов: плазмиды, вирусные векторы, космиды, искусственные хромосомы.
- Плазмиды наиболее часто используются.
-
Плазмиды
- Двухцепочечные внехромосомные кольцевые последовательности ДНК.
- Реплицируются с использованием механизма репликации клетки-хозяина.
- Могут быть конъюгативными или неконъюгативными.
- Используются для клонирования и экспрессии белка.
-
Вирусные векторы
- Генно-инженерные вирусы с модифицированной ДНК или РНК.
- Неинфекционные, но содержат вирусные промоторы и трансген.
- Требуют вспомогательных вирусов для крупномасштабной трансфекции.
-
Искусственные хромосомы
- Произведенные хромосомы дрожжей, бактерий или человека.
- Могут содержать большой фрагмент ДНК.
- Требуют источник репликации, центромеру и концевые последовательности теломер.
-
Транскрипция и экспрессия
- Транскрипция необходима для экспрессии гена.
- Экспрессия может быть конститутивной или индуцируемой.
- Вирусные промоторы часто используются для конститутивной экспрессии.
- Экспрессионные векторы требуют больше компонентов для трансляции.
-
Векторы экспрессии прокариот
- Используются индуцируемые промоторы, такие как lac и T7.
- Требуются сайт связывания с рибосомой и сайт инициации трансляции.
-
Векторы экспрессии у эукариот
- Требуются последовательности для полиаденилирования, минимальной длины UTR и последовательности Козака.
-
Особенности векторов
- Источник репликации, промотор, сайт клонирования, генетические маркеры, устойчивость к антибиотикам, эпитоп, репортерные гены.
-
Сайт множественного клонирования
- Расположен внутри lacZ-α
- Вставка нарушает последовательность гена
- Приводит к неактивности β-галактозидазы
-
Идентификация клеток с вставкой
- Клетки с вектором со вставкой выделяют синим/белым
- Клетки, экспрессирующие β-галактозидазу, выглядят как синие колонии
- Белые колонии могут содержать вставку
-
Другие репортеры
- Зеленый флуоресцентный белок
- Люцифераза
-
Целевая последовательность
- Экспрессирующие векторы кодируют целевую последовательность
- Направляет белок к определенной органелле или месту
-
Признаки очистки белка
- Полигистидин-tag
- Глутатион-S-трансфераза
- Мальтозосвязывающий белок
- Повышают растворимость целевого белка
-
Белок-мишень и белковая метка
- Белок-мишень сливается с белковой меткой
- Сайт расщепления протеазой позволяет удалить метку позже
-
Дополнительные термины
- Плазмида
- Вирусный переносчик
- Вектор клонирования
- Вектор экспрессии
- Гибридный вектор
- Мини-круг
- Рекомбинантная ДНК
- Обнаженная ДНК
- Переносчик (эпидемиология)
- Искусственные хромосомы человека
- Искусственные хромосомы дрожжей
- Бактериальные искусственные хромосомы
- ДНК-вакцинация
-
Рекомендации
- Дальнейшее чтение
- Внешние ссылки
- Введение ученых Ваксмана в векторы
- Сравнение векторов для клинического переноса генов
- Модуль переноса генов