Оглавление
454 Науки о жизни
-
История компании
- Основана Джонатаном Ротбергом в 2004 году
- Первоначально называлась 454 Corporation
- В 2005 году получила золотую медаль журнала Wall Street Journal
- В 2006 году инициировала проект “Геном неандертальца”
- В 2007 году приобретена компанией Roche за 154,9 миллиона долларов
- В 2013 году Roche закрыла компанию, производство продолжалось до 2016 года
-
Технология секвенирования
- Использовалась крупномасштабная параллельная система пиросеквенирования
- Секвенирование 400-600 мегабаз ДНК за 10-часовой цикл
- Система основана на закреплении ДНК на гранулах и амплификации методом ПЦР
- В 2005 году выпущен секвенатор GS20
- В 2008 году выпущены реагенты серии GS FLX Titanium
- В 2009 году представлена система GS Junior
-
Подготовка библиотеки ДНК и emPCR
- Геномная ДНК разделена на фрагменты и отполирована
- К концам фрагментов прикреплены адаптеры для амплификации и секвенирования
- Библиотека sstDNA иммобилизована на гранулах
- Гранулы эмульгированы с реагентами для амплификации
-
Последовательность действий
- Гранулы добавлены к смеси для инкубации и уложены слоями с ферментными гранулами
- Устройство центрифугировано для размещения гранул в лунках
- Загруженные пикопланшеты помещены в прибор FLX Instrument
- Секвенирование основано на пиросеквенировании, сигнал регистрируется ПЗС-камерой
- Данные сохранены в файлах формата flowgram (SFF)