Комплементарная ДНК
-
Определение и формы кДНК
- кДНК — ДНК, полученная обратной транскрипцией из РНК
- Существует в одноцепочечной и двухцепочечной формах
- Используется для экспрессии белков и секвенирования мРНК
-
Синтез кДНК
- РНК служит матрицей для синтеза кДНК
- В клеточной жизни кДНК генерируется вирусами и ретротранспозонами
- В молекулярной биологии РНК очищается и используется для синтеза кДНК in vitro
-
Очистка РНК
- РНК транскрибируется из геномной ДНК и очищается от клеточных компонентов
- Используются методы фенол-хлороформ, кварцевых колонок и экстракции на основе шариков
- Для удаления ДНК и белков используются ферменты ДНКаза и протеиназа К
-
Обратная транскрипция
- Синтез первой цепи кДНК с помощью обратной транскриптазы M-MLV или AMV
- Синтез второй цепи с помощью методов синтеза шпилек или процедуры Габлера и Хоффмана
-
Приложения кДНК
- Используется для клонирования генов, создания генных зондов и библиотек кДНК
- Применяется для экспрессии генов и изучения экспрессии генов методами RNA-seq и RT-qPCR
-
Вирусы и ретротранспозоны
- Вирусы используют кДНК для превращения вирусной РНК в мРНК
- Ретротранспозоны генерируют кДНК для перемещения внутри генома
-
Патентоспособность кДНК
- Верховный суд США постановил, что кДНК, содержащая только экзоны, может быть запатентована
- Изолированные последовательности природной ДНК, содержащие интроны, не могут быть запатентованы