Оглавление
Иммуноокрашивание
-
Определение иммуноокрашивания
- Иммуноокрашивание использует антитела для обнаружения белков в образцах.
- Термин первоначально относился к иммуногистохимическому окрашиванию.
-
Методы иммуноокрашивания
- Иммуногистохимия (IHC) использует антитела для окрашивания срезов тканей.
- Используются ферменты, такие как пероксидаза и щелочная фосфатаза, для визуализации.
- Альтернативно, радиоактивные элементы могут быть использованы для авторадиографии.
-
Подготовка тканей
- Фиксация тканей важна для сохранения морфологии клеток.
- Формалин и парафин используются для фиксации, но некоторые антигены требуют криозаморозки.
- Вибратом не требует обработки органическими растворителями, но имеет недостатки в нарезке.
-
Методы поиска антигенов
- Термоиндуцированное извлечение эпитопа (HIER) и протеолитическое извлечение эпитопа (PIER) улучшают обнаружение антигенов.
- Оптимизация методов фиксации и времени инкубации важна для качественного окрашивания.
-
Проточная цитометрия
- Используется для анализа клеток, экспрессирующих специфические белки.
- Преимущества: определение отдельных популяций клеток, повышенная чувствительность, многоцветный анализ.
- Недостатки: высокие капитальные затраты, нарушение структурной взаимосвязи.
-
Вестерн-блоттинг
- Выявляет специфические белки в экстрактах клеток или тканей.
- Белки разделяются по размеру и переносятся на мембрану для исследования.
- Обнаружение проводится с помощью антител, связанных с пероксидазой.
-
Иммуноферментный анализ (ELISA)
- Диагностический метод для количественного определения белков в плазме крови.
- Белки абсорбируются на планшетах, антитела используются для зондирования.
- Методы обнаружения основаны на колориметрии или хемилюминесценции.
-
Иммуноэлектронная микроскопия (EM)
- Используется для детального изучения микроархитектуры тканей.
- Антитела, меченные частицами тяжелых металлов, визуализируются с помощью просвечивающей электронной микроскопии.
- Биотинилирование белков in vivo улучшает совместимость с протоколами фиксации.
-
Методологический обзор
- Антитела используются для обнаружения белковых эпитопов.
- Первичное антитело может быть помечено ферментом или флуорофором.
- Вторичные антитела могут быть использованы для более широкого обнаружения.
- В электронной микроскопии антитела связаны с частицами золота.
-
Приложения
- Иммуноокрашивание используется в клинической диагностике и лабораторных исследованиях.
- Клинически применяется для диагностики рака.
- В лабораторных исследованиях используется для исследования белков и их экспрессии.