Криогенная электронная томография
-
Описание метода cryoET
- Метод визуализации для реконструкции трехмерных объемов образцов с высоким разрешением (~1-4 нм)
- Используется для биологических макромолекул и клеток
- Специализированное приложение просвечивающей электронной криомикроскопии (CryoTEM)
-
Процесс криогенной электронной томографии
- Образцы визуализируются при наклоне, получая серию 2D-изображений
- Изображения объединяются для получения 3D-реконструкции
- Образцы замораживаются в криогенных условиях (< -150°C)
-
Преимущества cryoET
- Возможность реконструировать трехмерные объемы отдельных объектов
- Метод in situ, так как замораживание фиксирует образец на месте
-
Ограничения cryoET
- Толщина образца должна быть менее ~500 нм
- Радиационное повреждение из-за высокого флюенса электронов
- Анизотропное разрешение из-за взаимодействия электронов с веществом
-
Методы улучшения разрешения
- Усреднение субтомограмм для увеличения отношения сигнал/шум
- Интеграция с коррелированной криофлуоресцентной световой микроскопией и световой микроскопией со сверхвысоким разрешением
-
Рекомендации и внешние ссылки
- Начало обучения на курсе крио-ЭМ в Калифорнийском технологическом институте