Северное пятно
-
Основы нозерн-блоттинга
- Нозерн-блоттинг — это метод анализа экспрессии генов, основанный на гибридизации РНК с зондами.
- Он отличается от других методов блоттинга, таких как вестерн-блоттинг, тем, что анализирует РНК, а не ДНК.
-
Процедура нозерн-блоттинга
- Процесс начинается с выделения РНК из образца и разделения ее с помощью гель-электрофореза.
- РНК переносится на нейлоновую мембрану, где она иммобилизуется и гибридизуется с зондами.
- После гибридизации сигналы регистрируются с помощью рентгеновской пленки, а затем могут быть количественно определены.
-
Гели и зонды
- Гели обычно используют агарозные с формальдегидом для ограничения вторичной структуры РНК.
- Зонды состоят из нуклеиновых кислот, комплементарных исследуемой РНК, и могут быть помечены радиоактивными изотопами или хемилюминесцентными субстратами.
-
Приложения нозерн-блоттинга
- Метод позволяет наблюдать за экспрессией генов в различных условиях, включая развитие, патогенную инфекцию и лечение.
- Он используется для выявления избыточной экспрессии онкогенов и регуляции генов-супрессоров опухолей.
-
Преимущества и недостатки нозерн-блоттинга
- Нозерн-блоттинг имеет преимущества в определении размера РНК и наблюдении за альтернативными продуктами сплайсинга.
- Он также позволяет использовать зонды с частичной гомологией и измерять качество и количество РНК на геле.
- Однако метод может быть чувствителен к РНКазам и требует осторожности в обращении с химикатами.
-
Обратный нозерн-блоттинг
- В обратном нозерн-блоттинге зонд представляет собой РНК, а субстрат — ДНК-фрагменты.
- Этот метод позволяет проводить профилирование экспрессии генов и отслеживать экспрессию многих генов.
Полный текст статьи: