Очистка белка

• Основы очистки белков

  • Очистка белков включает удаление примесей и сохранение нативной структуры. 
  • Методы очистки включают осаждение, аффинную хроматографию, ВЭЖХ и иммуноаффинную хроматографию. 

• Осаждение

  • Осаждение используется для удаления крупных молекул и основано на их способности к коагуляции. 
  • Осаждение может быть достигнуто добавлением солей, таких как сульфат аммония, или органических растворителей, таких как ацетон. 

• Аффинная хроматография

  • Аффинная хроматография основана на специфическом связывании белков с лигандами. 
  • Используется для очистки белков, связанных с мембранами или гликопротеинами. 

• ВЭЖХ

  • ВЭЖХ обеспечивает быстрое разделение белков с использованием градиентов органических растворителей. 
  • Используется для очистки белков с высокой гидрофобностью. 

• Иммуноаффинная хроматография

  • Иммуноаффинная хроматография основана на связывании антител с антигенами. 
  • Используется для очистки белков из природных источников. 

• Концентрация очищенного белка

  • Лиофилизация и ультрафильтрация используются для концентрирования белков. 

• Оценка степени очистки

  • SDS-PAGE и иммунопреципитация используются для мониторинга процесса очистки. 
  • Вестерн-блоттинг и ИФА применяются для количественного определения белков. 

• Аналитический электрофорез

  • Электрофорез в денатурирующих условиях используется для препаративного и аналитического разделения белков. 
  • Неденатурирующая электрофоретическая процедура используется для выделения металлопротеинов.