Очистка белка
-
Основы очистки белков
- Очистка белков включает удаление примесей и сохранение нативной структуры.
- Методы очистки включают осаждение, аффинную хроматографию, ВЭЖХ и иммуноаффинную хроматографию.
-
Осаждение
- Осаждение используется для удаления крупных молекул и основано на их способности к коагуляции.
- Осаждение может быть достигнуто добавлением солей, таких как сульфат аммония, или органических растворителей, таких как ацетон.
-
Аффинная хроматография
- Аффинная хроматография основана на специфическом связывании белков с лигандами.
- Используется для очистки белков, связанных с мембранами или гликопротеинами.
-
ВЭЖХ
- ВЭЖХ обеспечивает быстрое разделение белков с использованием градиентов органических растворителей.
- Используется для очистки белков с высокой гидрофобностью.
-
Иммуноаффинная хроматография
- Иммуноаффинная хроматография основана на связывании антител с антигенами.
- Используется для очистки белков из природных источников.
-
Концентрация очищенного белка
- Лиофилизация и ультрафильтрация используются для концентрирования белков.
-
Оценка степени очистки
- SDS-PAGE и иммунопреципитация используются для мониторинга процесса очистки.
- Вестерн-блоттинг и ИФА применяются для количественного определения белков.
-
Аналитический электрофорез
- Электрофорез в денатурирующих условиях используется для препаративного и аналитического разделения белков.
- Неденатурирующая электрофоретическая процедура используется для выделения металлопротеинов.
Полный текст статьи: