Оглавление [Скрыть]
- 1 Трансфекция
- 1.1 Определение трансфекции
- 1.2 Эволюция термина
- 1.3 Методы трансфекции
- 1.4 Стабильная и кратковременная трансфекция
- 1.5 Трансфекция РНК
- 1.6 Ограничения метода сайленсинга
- 1.7 Методы доставки РНК в клетки
- 1.8 Функции РНК в клетках
- 1.9 Инкапсуляция РНК в липидные наночастицы
- 1.10 Иммунный ответ на РНК
- 1.11 Трансфекция короткой РНК
- 1.12 Трансфекция длинной РНК
- 1.13 Иммуногенность длинной РНК
- 1.14 Повторная трансфекция длинной РНК
- 1.15 Полный текст статьи:
- 2 Трансфекция
Трансфекция
-
Определение трансфекции
- Трансфекция – это процесс введения нуклеиновых кислот в эукариотические клетки.
- Трансфекция может быть физической, химической или биологической.
-
Эволюция термина
- Первоначально трансфекция означала заражение путем трансформации.
- В клетках животных термин “трансфекция” приобрел значение изменения свойств клеток.
-
Методы трансфекции
- Физические методы включают электропорацию, микроинъекции и гидродинамическую доставку.
- Химические методы включают липофекцию, использование полимеров и фосфата кальция.
- Биологические методы используют вирусы для доставки генов.
-
Стабильная и кратковременная трансфекция
- Стабильная трансфекция приводит к интеграции ДНК в геном клетки.
- Кратковременная трансфекция не интегрирует ДНК в геном.
-
Трансфекция РНК
- РНК может быть трансфицирована для кратковременной экспрессии белков.
- миРНК используются для сайленсинга РНК и нокдауна белков.
-
Ограничения метода сайленсинга
- Токсичность трансфекции для клеток
- Потенциальное “нецелевое” воздействие на экспрессию других генов/белков
-
Методы доставки РНК в клетки
- Микроинъекции
- Электропорация
- Трансфекция, опосредованная липидами
-
Функции РНК в клетках
- Трансляция РНК в белок
- Регуляторные эффекты РНК (нокдаун, RNAi)
-
Инкапсуляция РНК в липидные наночастицы
- Прорыв в производстве РНК-вакцин
- Устранение технических барьеров
-
Иммунный ответ на РНК
- Врожденная иммунная система активируется длинными молекулами РНК
- Воспаление повышает чувствительность клеток
-
Трансфекция короткой РНК
- Используется для снижения экспрессии белка или экспрессии микроРНК
- Не сопряжена с риском модификации ДНК клетки
-
Трансфекция длинной РНК
- Целенаправленное введение молекул РНК длиной более 25 нм
- Вызывает иммунный ответ, включая блокаду трансляции и апоптоз
-
Иммуногенность длинной РНК
- Фосфорилирование 5′-конца может влиять на иммуногенность
- Модифицированные нуклеотиды в мРНК могут предотвращать активацию иммунной системы
-
Повторная трансфекция длинной РНК
- Ингибирование интерферона-β, STAT2 и EIF2AK2 предотвращает гибель клеток
- Метод использован для экспрессии перепрограммирующих белков